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WB检测试剂盒(适用于小鼠一抗),生工,D601017-0005 5 ASSAYS
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WB检测试剂盒(适用于小鼠一抗)
英文名 WB Kit (Apply to Mouse primary antibody)
相关类别 Western Blot 储存 冷藏(2-8℃) 避光
宿主 WB检测试剂盒(适用于小鼠一抗)    

产品描述

概述

WB试剂盒具有使用方便、操作简单、检测灵敏度高、背景低和系统稳定性强等多种优点。本试剂盒适用于宿主为小鼠的一抗实验系统。

特点

  • 1. 操作简便:无需太多准备,拿到试剂盒即能开展试验。 2. 重现性好:实验结果重复性高。 3. 适用于HRP显色系统。

使用说明

1. 制样:根据上样量和样本浓度计算样本体积,加入适量的上样缓冲液(5×),放入沸水中煮15分钟。 2. 制胶:根据目的蛋白分子量不同配制不同浓度的分离胶(下层胶),以下仅供参考。分离胶凝固后再配制5%的浓缩胶(上层胶)。 分离胶浓度 蛋白相对分子量 15% <10 kDa 12% 10-30 kDa 8% 30-70 kDa 6% >70 kDa 3. 电泳:加入电泳缓冲液,起始电压80V,待考马斯亮蓝蓝色电泳至分离胶约 30min,将电压调至120V待考马斯亮蓝蓝色到达分离胶底部。 4. 转膜:切除浓缩胶,将分离胶放置于转膜缓冲液中,事先准备好与胶大小相同的印迹膜和滤纸。印迹膜如果是PVDF膜需要在甲醇中活化2分钟,再转入转膜缓冲液中浸泡10分钟。滤纸直接放在转膜缓冲液中浸泡10分钟。一般湿转放置顺序:转膜夹黑色面(负极)-海绵垫-滤纸-胶-印迹膜-滤纸-海绵垫-红色面(正极);半干转:负极-滤纸-胶-印迹膜-滤纸-正极。以6╳8cm的膜为例,湿转恒流一般设置150mA每张膜,可根据分子量的大小调整转膜的时间,分子量大的转膜时间长一些,反之,时间短一些。转膜需在冰浴中进行。 5. 封闭:将膜从转膜仪中取出,放入封闭液中,37℃封闭1-2小时。 6. 洗涤:弃去封闭液,加入10ml的TBST,置摇床上洗涤10分钟。 7. 孵育一抗:弃去洗涤液,加入一抗稀释液,摇床上4℃孵育过夜或37℃孵育1-2小时。 8. 洗涤:次日,弃去一抗稀释液,加入10ml的TBST,置摇床上洗涤10分钟,重复2次。 9. 孵育二抗:弃去洗涤液,加入二抗稀释液,摇床上室温或37℃孵育40-60分钟。 10. 洗涤:弃去二抗稀释液,加入10ml的TBST,置摇床上洗涤10分钟,重复2次。 11. ECL曝光:弃去洗涤液,每1cm2膜加入0.05 ml的ECL工作液,避光2分钟,直接在机器中观察,或者暗房中经显影液、定影液曝光显色。

组份

上样缓冲液(5×) 脱脂奶粉 洗涤液原液(20×) 吐温-20 Marker (10,17,28,36,55,72,95,130,250KD) HRP标记的二抗(抗小鼠) ECL发光液A ECL发光液B

浓度
规格 5 ASSAYS
保存 冷藏(2-8℃) 避光

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