· 别名 : 人淋巴细胞分离液
· 英文名称 : Lymphocyte Separation Medium (Human)
· 储存条件 : 15−25℃避光保存
· 单位 : 200ml/瓶 20瓶/箱
外周血中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞等细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同,红细胞和粒细胞密度较大,为1.090 g/ml 左右,而淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090 g/ml,血小板为1.030~1.035 g/ml。为此,将葡聚糖(右旋糖酐)和泛影酸葡甲胺按一定比例混合,调整比重、pH 值和渗透压,经过澄清及过滤除菌后制成一种密度在1.077g/ml 并且近于等渗的溶液(分层液),经过密度梯度离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。
本品为带有乳光或微乳光的注射水溶液,主要组成成份是葡聚糖(右旋糖酐)与泛影酸葡甲胺。适用于从人抗凝血液中分离单个核细胞(主要为淋巴细胞),无菌条件下所分离的细胞可用于免疫学检测。
分离方法说明及图例:
取新鲜抗凝血1ml,与生理盐水1:1 混匀后,小心加于2ml细胞分离液之液面上;以400g(约1500转/分,半径15cm水平转子)离心20分钟,此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层:为血浆层。第二层:为环状乳白色淋巴细胞层。第三层:为透明分离液层。第四层:为红细胞层。收集第二层细胞放入含生理盐水4-5ml的试管中,充分混匀后,以400g(约1500转/分)离心20分钟。沉淀经2次洗涤后即得所需淋巴细胞。
注: 提取率约为80%。
注意事项:
A.本分离液要求血液为新鲜抗凝血,避免冷冻和冷藏;在收集血液和分离过程中,应注意无菌操作,避免微生物污染。
B.本实验要求,在正常大气压下,分离液、分离样本以及分离环境温度为20℃±2℃。分离液在低温时呈较高密度,在高温时呈较低密度。细胞分离液从冰箱取出后,不可立即使用,操作前可将样本和分离液置于20℃水浴中复温20分钟以保证分离温度。
C.由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,可能影响分离效果,用户可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。
D.最好使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
E.最优抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂体积。
产品性能指标:
密度 1.077±0.001g/ml
pH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmol/kg
内毒素 ≤0.5EU/ml
无菌 直接接种培养14天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下
贮藏及保存期限:
本分离液是敏光型的,应在18℃-25℃避光保存,有效期两年。启封后置4℃保存,若保证无微生物污染, 4℃可长期保存。保存温度较低(10℃以下)时本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。
浓度 | |
规格 | 200ml*20 |
保存 | 15−25℃避光保存 |
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