重组蛋白A/G预装柱
目录号 |
规格(ml) |
备注说明 |
PAG000001 |
1 |
手动 |
PAG000005 |
5 |
手动 |
PAG100001 |
1 |
自动 |
PAG100005 |
5 |
自动 |
重组蛋白A/G填料
目录号 |
规格(ml) |
PAG001005 |
5 |
PAG001025 |
25 |
PAG001100 |
100 |
产品规格与详情
技术指标:每毫升rProtein A/G结合35~50mg人血清IgG,38-51mg兔IgG /ml填料,5.5-18.5mg鼠血清IgG/ml填料,4.5-17.8mg鼠腹水IgG/ml填料
l 产品简介
通过基因重组技术,将蛋白A与蛋白G基因重组于同一质粒载体中,并在大肠杆菌中进行表达,得到分子量为50.5KDa的可溶性蛋白A/G。该可溶性蛋白A/G具有四个IgG结合位点,来自于蛋白A;和两个IgG的结合位点,来自于蛋白G。因具有上述特性,使得基因工程重组蛋白A/G具有广泛的IgG的结合能力,对各种哺乳类动物的IgG都能结合,使得该产品在IgG的诊断和纯化中具有十分广泛的用途。
本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术,将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,使得单位体积中结合更多蛋白A/G,产品最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A或蛋白G、蛋白A/G偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化,或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。
l 产品技术指标
rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值:4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF
rec-Protein AG分子量:50.5 KDa
每分子rec-Protein G可结合IgG位点数:6个(4个来自于蛋白A,2个来自于蛋白G)
rec-Protein A可结合白蛋白位点数:无
线性流速:300-500 cm/h
耐压指数:≤0.3 MPa(填料)
l 注意事项
请在实验前仔细阅读本rProtein A预装柱使用说明。同时,将所要的所有试剂、耗材拿出置于室温,恢复至室温使用。
l 产品保存
产品储存于2-8℃,保质期两年。
l rProtein A/G-Sepharose 4FF纯化IgG抗体步骤
以下方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体,不同来源的IgG与rProteinA/ G的结合能力不同,具体情况请参考表1。
1. 将血清或腹水样品(推荐上样量2 mL样品/mL柱)装入截留分子量3.5 KDa透析带中,于4 ℃冰箱中对1× PBS(pH 7.4)透析过夜;
2. 将rProtein A/G-Sepharose 4FF装柱固定好,用10倍柱体积1× PBS(pH 7.4)平衡层析柱,建议流速为1 mL/min;
3. 将透析好的样品从层析柱上端加入,建议流速为1 mL/min,为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样,重复2遍(或者是将样品1次性加入层析柱后置于摇床上,轻轻摇动,结合30 min);
4. 样品结合后,用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱,建议流速为1 mL/min,勿让层析柱滴干;
5. 洗脱IgG,向层析柱上端加入洗脱液(100 mM甘氨酸,pH 2.7),用预先加有100 μL中和缓冲液(1M Tris,pH 9.0)的4 mL Ep管接收,2 mL /管,共收集10倍柱体积,进行10 % SDS-PAGE电泳,确定IgG样品所在管,回收样品。
6. 加入5倍柱体积再生缓冲液(100 mM甘氨酸,pH 2.0),再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。 向层析柱加入10倍柱体积, 20% Ethanol,于4~8 ℃冰箱。
表1 rProtein A/G 与Ig结合能力情况
IgG类型 |
Protein A |
Protein G |
IgG类型 |
Protein A |
Protein G |
人 IgG1 |
++++ |
++++ |
大鼠 IgG2b |
- |
++ |
人 IgG2 |
++++ |
++++ |
大鼠 IgG2c |
+ |
++ |
人IgG3 |
- |
++++ |
大鼠 IgM |
+/- |
- |
人IgG4 |
++++ |
++++ |
兔 Ig |
++++ |
+++ |
人IgA |
++ |
- |
鸡 Ig |
- |
+ |
人n IgD |
++ |
- |
仓鼠 Ig |
+ |
++ |
人IgE |
++ |
- |
豚鼠 Ig |
++++ |
++ |
人 IgM |
++ |
- |
牛 Ig |
++ |
++++ |
小鼠 IgG1 |
+ |
++++ |
马 |
++ |
++++ |
小鼠 IgG2a |
++++ |
++++ |
奶牛 |
++ |
++++ |
小鼠 IgG2b |
+++ |
+++ |
猪 |
+++ |
+++ |
小鼠 IgG3 |
++ |
+++ |
绵羊 |
+/- |
++ |
小鼠 IgM |
+/- |
- |
山羊 |
- |
++ |
大鼠 IgG1 |
- |
+ |
|
|
|
大鼠 IgG2a |
- |
++++ |
|
|
|
表2 rProtein A/G预装柱系列产品参数
特性 |
rProtein A/G |
特性 |
rProtein A |
柱体积规格 |
1mL,5mL |
填料稳定性 |
>20纯化周期 |
基质组成 |
4%高交联度琼脂糖 |
pH稳定性 |
pH 2~11 |
基质平均粒径 |
90μm |
推荐工作pH范围 |
pH 3~10 |
功能基团 |
rProtein A/G:50.5kDa; IgG结合位点:6个 |
推荐在位清洗pH范围 |
pH 2~11 |
配基密度 |
≈3mg rProtein A/mL 基质 |
工作温度 |
4~40℃ |
结合能力 |
35-50mg人IgG/mL填料 |
运输条件 |
20%乙醇浸泡,室温运输 |
推荐流速 |
30~150cm/mL |
贮藏条件 |
20%乙醇条件下, 4~8℃保存 |
柱体积 | 1ml |
最大上样量 | |
包装(支/盒) | 1 |
规格 | 基质平均粒径 90μm |
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