重组蛋白G预装柱
目录号 |
规格(ml) |
备注说明 |
PGC000001 |
1 |
手动 |
PGC000005 |
5 |
手动 |
PGC100001 |
1 |
自动 |
PGC100005 |
5 |
自动 |
产品规格与详情
技术指标:每毫升rProtein G结合18-45mg人血清IgG,18-42mg兔IgG /ml填料,4.5-15mg鼠血清IgG/ml填料,5-15mg鼠腹水IgG/ml填料
l 产品简介
蛋白G可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合。使用的rec-Protein G是通过基因工程-重组蛋白的方法表达获得。由于重组表达的rec-Protein G去除了除Fc端以外的其他非特异性结合位点,特异性更好。
本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术,将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,使得单位体积中结合更多蛋白G,最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白G偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化,或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。
l 产品技术指标
rec-Protein G/Sepharose 比值:2.7~3.2mg rec-Protein G/ml Sepharose
rec-Protein G分子量:22.5KDa
每分子rec-Protein G可结合IgG位点数:2个
rec-Protein G可结合白蛋白位点数:无
线性流速:300-500 cm/h
耐压指数:≤0.3 MPa(填料)
l 注意事项
请在实验前仔细阅读本rProtein G预装柱使用说明。同时,将所要的所有试剂、耗材拿出置于室温,恢复至室温使用。
l 产品保存
产品储存于2-8℃,保质期两年。
l rec-Protein G预装柱纯化IgG抗体步骤
以下实验方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体,不同来源的IgG与rec-Protein G的结合能力不同,具体情况请参考表1。
1. 将血清或腹水样品(推荐上样量2 mL样品/mL柱)装入截留分子量3.5 KDa透析带中,于4 ℃冰箱中对1× PBS(pH 7.4)透析过夜;
2. 将rec-Protein G-Sepharose装柱固定好,用10倍柱体积1× PBS(pH 7.4)平衡层析柱,建议流速为1 mL/min;
3. 将透析好的样品从层析柱上端加入,建议流速为1 mL/min,为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样,重复2遍(或将样品1次性加入层析柱后置于摇床上,轻轻摇动,结合30 min);
4. 样品结合后,用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱,建议流速为1 mL/min,勿让层析柱滴干;
5. 洗脱IgG,向层析柱上端加入洗脱液(100 mM甘氨酸,pH 2.7),用预先加有100 μL中和缓冲液(1M Tris,pH 9.0)的4 mL Ep管接收,2 mL /管,共收集10倍柱体积,进行10 % SDS-PAGE电泳,确定IgG样品所在管,回收样品。
6. 用5倍柱体积再生缓冲液(100 mM甘氨酸,pH 2.0)进行再生处理,再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。最后于层析柱中加入10倍柱体积, 20% Ethanol,4~8 ℃冰箱保存处理。
l 同类产品纯化效果比较
美国某知名品牌的rProtein G Sepharose 4FF 亲和层析柱对人血清进行纯化,其对人IgG的最大结合量约为34 mg/mL Medium。
表1 rProtein G与不同来源Ig的反应活性情况
IgG类型
Protein G
IgG类型
Protein G
IgG类型
Protein G
人 IgG1
++++
小鼠 IgG2b
+++
仓鼠 Ig
++
人 IgG2
++++
小鼠 IgG3
+++
豚鼠 Ig
++
人IgG3
++++
小鼠 IgM
-
牛 Ig
++++
人IgG4
++++
大鼠 IgG1
+
马
++++
人IgA
-
大鼠 IgG2a
++++
奶牛
++++
人n IgD
-
大鼠 IgG2b
++
猪
+++
人IgE
-
大鼠 IgG2c
++
绵羊
++
人 IgM
-
大鼠 IgM
-
山羊
++
小鼠 IgG1
++++
兔 Ig
+++
小鼠 IgG2a
++++
鸡 Ig
+
表2 rProtein G预装柱系列产品参数
特性 |
rProtein G |
特性 |
rProtein G |
柱体积规格 |
1mL,5mL |
填料稳定性 |
>20纯化周期 |
基质组成 |
4%高交联度琼脂糖 |
pH稳定性 |
pH 2~11 |
基质平均粒径 |
90μm |
推荐工作pH范围 |
pH 3~10 |
功能基团 |
rProtein G:22.5kDa; IgG结合位点:2个(B,C Domain) |
推荐在位清洗pH范围 |
pH 2~11 |
配基密度 |
>3 mg rProtein A/mL 基质 |
工作温度 |
4~40℃ |
结合能力 |
18-45mg人IgG/mL填料 |
运输条件 |
20%乙醇浸泡,室温运输 |
推荐流速 |
30~150cm/mL |
贮藏条件 |
20%乙醇条件下, 4~8℃保存 |
柱体积 | 5ml |
最大上样量 | |
包装(支/盒) | 1 |
规格 | 基质平均粒径 90μm |
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